Клишина И. И.: Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Глава 3.

ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ

Диссертация
на соискание учёной степени
Автор:

КЛИШИНА ИННА ИВАНОВНА

ВЛИЯНИЕ ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА
НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ
НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ
ПРИ ОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

 

 

Часть II.

Глава 3.
ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
ПРОДУКТОВ ПЧЕЛОВОДСТВА У ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ

 

3.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ГОМОГЕНАТА И ЛИОФИЛИЗАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК

Определение острой токсичности проводили на беспородных белых мышах обоего пола массой 10 – 20 г методом Кербера [5] с учетом рекомендаций фармакологического комитета по изучению общетоксического действия фармакологических средств [110].

Гомогенат и лиофилизат трутневых личинок вводили в объеме 0,5 мл в виде водного раствора однократно металлическим зондом в желудок в диапазоне доз 10 – 5000 мг/кг. Общий срок наблюдения за состоянием животных составил 14 суток.

 

Показатели острой токсичности по Керберу гомогената и лиофилизата трутнех личинок представлены в таблице 1.

Таблица 1 Вещество Дозы, мг/кг 10 100 1000 5000 ГТЛ Выжило 6 6 6 6 Погибло 0 0 0 0 D 90 900 4000 Z 0 0 0 ZD 0 0 0 ЛТЛ Выжило 6 6 6 6 Погибло 0 0 0 0 D 90 900 4000 Z 0 0 0 ZD 0 0 0

 

Гибель животных в течение всего срока наблюдения не выявлена. Наблюдение за животными на протяжении двух недель не выявило каких-либо изменений в их поведении, потреблении пищи и воды. Интенсивность и характер двигательной активности, частота и глубина дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова, консистенция фекальных масс не отличались от нормы. Введение более высоких доз не представилось возможным по техническим причинам. Таким образом, LD50 составляла больше 5000 мг/кг. Это позволяет отнести трутневый расплод согласно классификации Сидорова К.К. [131] к практически нетоксичным веществам.

Показатели острой токсичности гомогената и лиофилизата трутневых личинок

Исходя из полученных данных для экспериментов нами были выбраны дозы для ГТЛ 200 мг/кг и 50 мг/кг (1/25 и 1/100 от ориентировочной LD₅₀), для ЛТЛ 100 и 50 мг/ кг (1/50 и 1/100 от ориентировочной LD_S0). Учитывая, что в ГТЛ сухой остаток составляет приблизительно ¹А от исходной массы, а также учитывая рекомендуемые дозы [93,139] для использования препаратов из
продуктов пчеловодства (апилак, прополис), также нами была выбрана для ЛТЛ еще доза 13 мг/ кг.

 

3.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕПАТОТОКСИЧНОСТИ ГОМОГЕНАТА И ЛИОФИЛИЗАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК

Гепатотоксичность выбранных доз определяли по продолжительности нембуталового сна у крыс по Гацура В.В. [27]. За сутки до введения этаминала натрия животным per os однократно вводили лиофилизат трутневых личинок в дозах 13, 50, 100 мг/кг и гомогенат трутневых личинок в дозе 200 мг/ кг в виде водной суспензии в объеме 1 мл на 100 г массы тела. Контрольной группе животных вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. Ровно через сутки всем группам животных вводили этаминал натрия (нембутал) в дозе 30 мг/кг. Регистрировали время засыпания каждого животного и время пробуждения. Результаты определения продолжительности нембуталового сна в опытах на крысах представлены в таблице 2.

Таблица 2

Продолжительность нембуталового сна у интактных крыс, получивших гомогенат и лиофилизат трутневых личинок

№ п/п	Группы животных	Количество животных	Продолжительность сна, мин
			М+ш	Р	%
1	Животные, получившие наркоз	6	60,67±2,39		90
2	Животные, получившие физиологический раствор и наркоз(контроль)	6	67,67+2,68	Pi>0,05	100
3	Животные, получившие ЛТЛ в дозе 13 мг/кг + наркоз	6	59,67+3,29	Pi>0,05 Р2>0,05	88
4	Животные, получившие ЛТЛ в дозе 50 мг/кг + наркоз	6	43,17±2,50	Pi<0,001 Р2<0,001	64
5	Животные, получившие ЛТЛ в дозе 100 мг/кг + наркоз	6	45,34±1,80	Pi<0,001 Р2<0,001	67
6	Животные, получившие ГТЛ в дозе 200 мг/кг + наркоз	6	41,00±1,97	Pi<0,001 Р2<0,001	61

 

Примечание: Р] – достоверность различий к показателям у животных, получивших только нембутловый наркоз;

?2 – достоверность различий к показателям у животных, получивших физиологический раствор и наркоз.

Как видно из приведенных данных, физиологический раствор в контрольных опытах, равно как и ЛТЛ в дозе 13 мг/кг существенно не меняли длительность этаминалнатриевого сна в сравнении с группой животных, получавших только наркоз. Введение ЛТЛ в дозах 50 и 100 мг/кг укоротило длительность сна на 29% (р<0,001) и 25% (р<0,001) соответственно. Наибольшее сокращение сна вызвало введение ГТЛ в дозе 200 мг/кг – на 32% (р<0,001). Приведенные данные свидетельствуют о способности трутневого расплода в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг и 200 мг/кг повышать детоксицирующую функцию печени.

 

3.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ АЛЛЕРГИЗАЦИИ ПРИ ВВЕДЕНИИ ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА

Учитывая тот факт, то трутневый расплод на треть состоит из белков [44, 54, 66, 80], которые по определению относятся к сильным аллергенам [122,165], мы сочли необходимым выявить состояние сенсибилизации к компонентам расплода. Сенсибилизация не является доказательством того, что именно на данный антиген (аллерген) разовьется аллергическая реакция, потому что для реализации аллергической реакции недостаточно лишь наличия сенсибилизации и аллергена, нужен ряд дополнительных условий. Однако сенсибилизация является первым необходимым этапом развития аллергических реакций [122]. Поскольку в развитии того или иного аллергического заболевания принимают участие несколько иммунологических механизмов, необходимо применять несколько методов, позволяющих оценить возможное участие всех четырех типов сенсибилизации по классификации Гелла – Кумбса [170].

Наряду с методами, выявляющими общее состояние сенсибилизации (тест-показатель повреждения нейтрофилов и определение степени гемолиза эритроцитов), мы использовали методы, выявляющие реагиновый (первый) и иммунокомплексный (третий) типы сенсибилизации: определение уровня гистамина и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) после 14-дневного интрагастрального запаивания крыс ЛТЛ в дозах 13 и 50 мг/кг в виде водной суспензии в объеме 1 мл на 100 г массы тела.

Полученные результаты сравнивались с контрольной группой животных, получавшей физиологический раствор в адекватных количествах (таблица 3).

Таблица 3

Влияние трутневого расплода на показатели сенсибилизации у интактных животных

№	Группы	Гемолиз		ППН, ед.		Гистамин,		ЦИК, ед.
п/п	животных	эритроцитов,%				мкмоль/л
		М±ш	Р	М±ш	р	М±ш	Р	М±ш	Р
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
1	Животные, получившие физ.раствор (П=6)	51,6+ 10,3		0		0,24± 0,03		18,4+ 2,97
2	Животные, получившие ЛТЛ в дозе 13 мг/кг (п=6)	51,8± 10,7	>0,05	0	>0,05	0,25± 0,02	>0,05	20,8+ 3,06	>0,05
3	Животные, получившие ЛТЛ в дозе 50 мг/кг (П=6)	52,2± 9,8	>0,05	0	>0,05	0,28+ 0.02	>0,05	24,03± 3,62	>0,05

Примечание: п – количество животных Р – достоверность различий по отношению к показателям группы животных, получивших физиологический раствор

 

Введение ЛТЛ в дозах 13 и 50 мг/кг не выявило достоверных различий в значениях показателей степени гемолиза эритроцитов, повреждения нейтрофилов, уровня гистамина и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови у контрольной и опытных групп. Полученные данные свидетельствуют о том, что трутневый расплод не является индуктором анафилактической и иммунокомплексной сенсибилизации.

 

3.4. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ВЛИЯНИЕ ЛИОФИЛИЗАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК, ПРОПОЛИСА, АПИЛАКА И ЛИВ-52 НА ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ

Прежде, чем перейти к изучению влияния трутневого расплода на показатели активности факторов естественного иммунитета и биохимические характеристики в условиях интоксикации, нами было исследовано его влияние на указанные показатели у здоровых животных. Все препараты вводились белым крысам в дозе 13 мг/кг в виде водной суспензии в объеме 1 мл на 100 г массы тела внутрижелудочно в течение 14 дней. Для препаратов прополиса, апилака и лив-52 данная доза соответствует границам терапевтических доз [93].

В качестве показателей функционального состояния печени у здоровых белых крыс использовались активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы сыворотки крови, содержание общего белка, нуклеиновых кислот, гликогена и холестерина ткани печени. Контролем служили показатели группы интактных животных.

Результаты опытов по влиянию на показатели функционального состояния печени ЛТЛ и препаратов сравнения (прополиса, апилака, лив-52) представлены в таблицах 4, 5, 6.

 

Таблица 4 Влияние лиофилизата трутневых личинок, прополиса, апилака и лив-52 на активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы у интактных животных № Группа животных АЛТ, мккат/л ЩФ, мккат/л п/п М±т Р М±ш Р 1 2 3 4 5 6 1 Интактные животные, п=8 0,51 ±0,01 1,26±0,05 2 Животные, получившие ЛТЛ, п=8 0,52±0,01 Ри>0,05 1,25±0,06 Р„>0,05 3 Животные, получившие прополис, п=8 0,53±0,02 Р„>0,05 1,29±0,04 Р„>0.05 4 Животные, получившие апилак, п=8 0,50±0,02 Ри>0.05 1,30+0,05 Ри>0,05 5 Животные, получившие лив-52, п=8 0,51 ±0,02 Ри>0,05 1,16±0,04 Р„>0,05

 

Примечание: п – количество животных в группе

Р_и – достоверность различий по отношению к показателям интактных животных

Таблица 5 Сравнительное влияние лиофилизата трутневых личинок, прополиса, апилака и лив-52 на белково-синтетическую функцию печени у интактных животных № п/п Группа животных Белок печени, мг/г Нуклеиновые кислоты печени, мг/г М±ш Р М±ш Р 1 2 3 4 5 6 1 Интактные животные, п=8 374,77 ±27,63 57,93 ±2,72 2 Животные, получившие ЛТЛ, п=8 416,32 ±23,13 Ри>0,05 59,99 ±2,81 Ри>0,05 3 Животные, получившие прополис, п=8 395,86 ±22,03 Ри>0,05 57,59 2,98 Р„>0,05 4 Животные, получившие апилак, п=8 375,91 ±17,48 Р„>0,05 53,49 ±3,48 Ри>0,05 5 Животные, получившие лив-52, п=8 394,44 ±12,45 Ри>0,05 54,95 ±2,46 Ри>0,05

 

Примечание: п – количество животных в группе

Р_и – достоверность различий по отношению к показателям интактных животных

Таблица 6 Сравнительное влияние лиофилизата трутневых личинок, прополиса, апилака и лив-52 на содержание холестерина и гликогена в печени интактных животных № Группа животных Холестерин, г/кг Гликоген, г/кг п/п М±ш Р М±ш Р 1 2 3 4 5 6 1 Интактные животные, п=8 2,73 0,17 19,82±1,55 2 Животные, получившие ЛТЛ, п=8 2,61 ±0,14 Ри>0,05 20,87±2,09 Р„>0,05 3 Животные, получившие Прополис, п=8 2,81 ±0,14 Р„>0,05 19,51 ±2,90 Р„>0,05 4 Животные, получившие апилак, п=8 2,59 ±0,11 Р„>0,05 14,20±1,16 Ри>0,05 5 Животные, получившие лив-52, п=8 2,63 ±0,15 Р„>0,05 19,08±0,41 Р„>0,05

 

не вызывают существенных изменений всего комплекса изучаемых биохимических показателей.

 

3.5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ВЛИЯНИЕ ЛИОФИЛИЗАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК, ПРОПОЛИСА, АПИЛАКА И ЛИВ-52 НА ПОКАЗАТЕЛИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ

В качестве показателей гуморальных факторов неспецифической резистентности использовали показатели активности лизоцима, бета-лизинов и бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК), а в качестве показателей клеточных факторов – -фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАЛ), процент завершенности фагоцитоза (ПЗФ) и фагоцитарный индекс лейкоцитов (ФИЛ).

Данные по динамике активности гуморальных факторов неспецифической резистентности у здоровых белых крыс при введении ЛТЛ и препаратов сравнения – прополиса, апилака и ЛИВ-52- представлены в таблице 7.

Таблица 7 Сравнительное влияние лиофилизата трутневых личинок, прополиса, апилака и лив-52 на гуморальные факторы неспецифической резистентности у интактных животных № Группы Лизоцим, (3-лизины, БАСК, п/п животных % активности % активности % активности 1 2 3 4 5 1 Интактные животные, п=8 46,38+2,31 71,96±2,71 68,26±3,18 2 Животные, 43,63±2,63 72,55±3,36 70,05±2,65 получившие ЛТЛ, Ри>0,05 Р„>0,05 Р„>0,05 п=8

 

Продолжение табл. 7 1 2 3 4 5 3 Животные, 48,50+3,41 68,08±3,69 70,88±3,55 получившие Ри>0,05 Ри>0,05 Р„>0,05 прополис, п=8 4 Животные, 48,1313,18 71,48±2,62 67,38±1,92 получившие Ри>0,05 Р„>0,05 Р„>0,05 апилак, п=8 5 Животные, 46,35+5,18 70,66±4,21 65,47±3,98 получившие Р„>0,05 Ри>0,05 Ри>0,05 лив-52, п=8

 

 

Таблица 8 Сравнительное влияние лиофилизата трутневых личинок, прополиса, апилака и лив-52 на показатели фагоцитарной активности нейтрофилов крови у интактных животных № Группы ФАЛ, ПЗФ, % ФИЛ, п/п животных % активности ед.активности 1 2 3 4 5 1 Интактные 34,75±1,83 44,75±2,94 0,37±0,02 животные, п=8 2 Животные, 38,25±1,58 40,00±1,77 0,39±0,02 получившие Ри>0,05 Ри>0,05 Р„>0,05 ЛТЛ, п=8 3 Животные, 31,75±1,92 43,75±2,38 0,33±0,02 получившие Р„>0,05 Р„>0,05 Ри>0,05 прополис, п=8 4 Животные, 29,50±2,65 37,13+2,13 0,29±0,02 получившие Ри>0,05 Р„>0,05 Ри>0,05 апилак, п=8 5 Животные, 31,14±2,35 38,67±2,56 0,31 ±0,02 получившие Р„>0,05 Р„>0,05 Ри>0,05 лив-52, п=8

 

Примечание: п – количество животных в группе;

Р_и – достоверность различий по отношению к показателям интактных животных. Из данных, представленных в таблице 8, видно, что показатели активности нейтрофилов крови при введении ЛТЛ, прополиса, апилака и ЛИВ- 52 оказались максимально близки к показателям интактных животных.

Таким образом, результаты опытов свидетельствуют, что ни ЛТЛ, ни препараты сравнения (прополис, апилак, лив-52) в физиологических условиях не изменяют активности гуморальных и клеточных факторов неспецифической резистентности.

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования показали, что ГТЛ и ЛТЛ практически нетоксичны, не оказывают гепатотоксического действия, и, напротив, в дозах 50 – 200 мг/кг повышают детоксицирующую функцию печени. При двухнедельном приеме в дозе 50 мг/кг и 13 мг/кг лиофилизат тртневых личинок не вызывает анафилактической и иммунокомплексной сенсибилизации; ЛТЛ, прополис, апилак, лив-52 в дозе 13 мг/кг существенно не изменяют активности гуморальных и клеточных факторов неспецифической резистентности и биохимических показателей функционального состояния печени у здоровых животных.

 

1. Клишина. И.И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Оглавление.
2. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Введение.
3. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации.  Часть I. Обзор литературы.
4. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть I. Глава 1. Продукты пчеловодства. Общая характеристика и применение.
5. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Собственные исследования.
6. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Глава 2. Материалы и методы собственных исследований.
7. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации.  Часть II. Глава 3. Исследование фармакологической активности продуктов пчеловодства у интактных животных.
8. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. . Часть II. Глава 4. Влияние гомогената трутнвых личинок на функциональное состояние печени и неспецифическую резистентность при тетрахлорметановой и изониазидовой интоксикации.
9. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Глава 5. Влияние лиофилизата трутневых личинок на функциональное состояние печени и неспецифическую резистентность при тетрахлорметановой интоксикации.
10. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Глава 6. Сравнительное влияние различных продуктов пчеловодства и официального гепатопротектора на функциональное состояние печени и неспецифическую резистентность при тетрахлорметановой интоксикации.
11. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Часть II. Глава 7. Некоторые стороны механизма действия трутневых личинок при тетрахлорметановой интоксикации.
12. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Общее заключение и выводы.
13. Клишина И. И. Влияние трутневого расплода на активность факторов неспецифической резистентности и функциональное состояние печени при острой интоксикации. Список литературы..