primenenie-trutnevogo-rasploda-4

ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ

14.00.25 — фармакология, клиническая фармакология

Диссертация
на соискание учёной степени
кандидата фармацевтических наукНаучный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Василенко Ю.К.,
Пятигорск, 2003 г.

Автор:

КЛИШИНА ИННА ИВАНОВНА
ВЛИЯНИЕ ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА
НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ
НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ
ПРИ ОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

 

Часть II.

Глава 4.
ВЛИЯНИЕ ГОМОГЕНАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК
НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ
И НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ
ПРИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОЙ
И ИЗОНИАЗИДОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

 

4.1. ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ ПРИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Трехкратное введение четыреххлористого углерода белым крысам характеризуется симптоматикой тяжелой интоксикации со значительным нарушением функционального состояния печени [22,31,42,84], тогда как введение животным ГТЛ существенно задерживало нарушение показателей функционального состояния печени (таблицы 9,10, рис. 1). Результаты экспериментов по изучению влияния ГТЛ на показатели активности ферментов аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы представлены в таблице 9 и на рис.1.

Таблица 9

Влияние гомогената трутневых личинок на активность ферментов аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в условиях ССЦ-интоксикации

Группа АЛТ, мккат/л ЩФ, мккат/л
п/п животных М±ш Р М±ш Р
1 2 3 4 6 7
1 Интактные животные, п=8 0,51 ±0,01 1,26±0,05
2 Животные с ССЦ-гепа- патией (конт­роль), п=8 1,57±0,03 Р2.1 <0,001 2,71 ±0,06 Р2-1<0,001

 

1 2 3 4 6 7
3 Животные, получившие ГТЛ 50 мг/кг и СС14, п=8 1,38±0,04 Рз-2<0,001 Рз-1<0,001 2,12+0,05 Р3.2<0,001 Рз-1<0,001
4 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 0,62±0,01 Р4.2<0,001

Р4.1>0,05

Р4_з<0,001

1,22+0,05 Р4.2<0,001

Р4-1>0,05

Р4.з<0,001

Как следует из приведенных данных, активность АЛТ при ССЦ- интоксикации возросла на 208% (р<0,001), что свидетельствовало о гибели печеночных клеток (цитолизе). Превентивное двухнедельное введение ГТЛ в дозе 200 мг/кг с последующим созданием модели тетрахлорметановой интоксикации снизило активность АЛТ на 60% (р<0,001), а в дозе 50 мг/кг — на 21% (р<0,001) по отношению к показателям группы контрольных животных.

У контрольных животных на высоте действия гепатотоксина активность ЩФ увеличилась на 115% (р<0,001) по сравнению с интактными животными. На фоне двухнедельного перорального приема ГТЛ в дозах 200 и 50 мг/кг введение тетрахлорметана проявилось снижением активности ЩФ на 55% (р<0,001) и на 22% (р<0,001) соответственно по сравнению с данными контрольной группы.

Таким образом, проведенные опыты свидетельствуют, что в условиях острой токсической гепатопатии, вызванной введением тетрахлорметана, трутневый расплод в дозе 50 и, особенно, в дозе 200 мг/кг обладает отчетливой способностью снижать цитолиз в печени и стимулировать инволюцию холестаза.

Результаты опытов по влиянию ГТЛ на содержание гликогена, триглицеридов, холестерина в печени и общего билирубина сыворотки крови представлены в таблице 10 и на рис. 1.

Таблица 10

Влияние гомогената трутневых личинок на уровень гликогена, триглицеридов, холестерина в печении и общего билирубина в сыворотке крови при СС14-гепатопатии

Условия опыта, Гликоген Триглице- Холесте­ Общий
п/п количество печени, риды рин билирубин
животных г/кг печени, печени, крови,
мкмоль/г г/кг мкмоль/л
1 2 3 4 5 6
1 Интактные 19,82±1,55 17,70±1,03 2,73±0,17 8,04±0,91
животные, п=8
2 Животные с 8,34±0,36 68,51±5,10 4,57±0,10 13,53±1,05
СС14 Рм<0,001 Р2-1<0,001 Р2-1<0,001 Р2-1<0,001
гепатопатиеи
(контроль), п=8
3 Животные, 11,15+0,69 41,1813,52 3,18±0,24 9,87±1,04
получившие Р3-2<0,05 Рз-2<0,01 Р3-2<0,01 Рз-2<0,05
ГТЛ 50 мг/кг и Рз-1<0,01 Р3.1 <0,001 Рз-1>0,05 Р3-1<0,01
СС14, п=8
4 Животные, 12,24±0,56 28,64±2,16 2,98±0,07 8,39±0,64
получившие Р42<0,001 Р4.2<0,001 Р4.2<0,001 Р4.2<0,001
ГТЛ 200 мг/кг и Р4.,<0,01 Р4.!<0,001 Р4.1>0,05 Р4.1>0,05
СС14, п=8 Р4-з>0,05 Р4-з<0,05 Р4-з>0,05 Р4.з>0,05

 

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Острая токсическая гепатопатия привела к значительному уменьшению уровня гликогена в печени (на 58%, р<0,001), повышению общего билирубина в сыворотке крови (на 68%, р<0,001) и повышению уровня холестерина и триглицеридов в печени (на 67%, р<0,001 и на 287%, р<0,001).

Экспериментальная интоксикация на фоне двухнедельного профилактического введения ГТЛ в дозе 200 мг/кг сопровождалась повышением количества гликогена в печени на 47% (р<0,001), снижением уровня общего билирубина сыворотки крови на 38% (р<0,001), уменьшением количества холестерина на 35% (р<0,001) и триглицеридов на 58% (р<0,001) по отношению к показателям контрольной группы животных.

Более слабый эффект наблюдался при введении ГТЛ в дозе 50 мг/кг: в печени количество гликогена повысилось на 34% (р<0,01), холестерин и триглицериды понизились на 30% (р<0,01) и на 40% (р<0,01) соответственно, общий билирубин в сыворотке крови снизился на 27% (р<0,01) относительно контроля.

Таким образом, при тетрахлорметановой гепатопатии введение ГТЛ, наряду с благоприятным воздействием на показатели цитолиза и холестаза, способствует нормализации метаболических процессов в печени.

 

4.2. ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ ПРИ ИЗОНИАЗИДОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Наряду с изучением влияния ГТЛ на функциональное состояние печени в условиях тетрахлорметановой интоксикации, аналогичные исследования проведены в условиях лекарственной интоксикации, вызванной введением токсических доз изониазида (200 мг/кг).

У контрольных животных лекарственная интоксикация привела к изменению активности ферментов аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови по сравнению с аналогичными показателями интактных животных (таблица 11 и рис.2).

Таблица 11

Влияние гомогената трутневых личинок на активность ферментов аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы при изониазидовой интоксикации

Группа АЛТ, мккат/л ЩФ, мккат/л
п/п животных М±т Р М±ш Р
1 2 3 4 5 6
1 Интактные животные, п=8 0,54±0,03 1,26±0,02
2 Животные с изониазидовой интоксикацией (контроль), п=8 0,73±0,03 Рм<0,001 1,83±0,03 Р2-1<0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 50 мг/кг и изониазид, п=8 0,47±0,03 Р3-2<0,001 Рз-1>0,05 1,52±0,04 Р3.2<0,001 Рз-1<0,01
4 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и изониазид, п=8 0,44+0,03 Р42<0,001

Р4.1>0,05

Р4-з>0,05

1,35±0,05 Р42<0,001

Р4.1>0,05

Р4.з<0,05

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

 

 

Активность АЛТ сыворотки крови увеличилась на 35% (р<0,001), а активность ЩФ — на 46% (р<0,001) по сравнению с показателями интактных животных.

Введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг снизило активность АЛТ по сравнению с контрольными животными на 36% (р<0,001) и 40% (р<0,001), а активность ЩФ — соответственно на 17% (р<0,001) и 26% (р<0,001).

Из полученных данных можно сделать вывод, что двухнедельный одновременный прием ГТЛ и изониазида предохраняет клетки печени от развития цитолиза и способствует инволюции холестаза.

Результаты влияния ГТЛ на уровень гликогена, холестерина в ткани печени крыс и на содержание общего билирубина в сыворотке крови при лекарственной интоксикации отражены в таблице 12 и на рис.2.

Таблица 12

Влияние гомогената трутневых личинок на содержание гликогена, холестерина в печении и общего билирубина в сыворотке крови при изониазидовой интоксикации

Условия опыта, Гликоген Холестерин Общий билирубин
п/п количество печени, печени, крови,
животных г/кг г/кг мкмоль/л
1 2 3 4 5
1 Интактные 19,82±1,55 2,43+0,11 8,02±0,91
животные, п=8
2 Животные с 10,68±0,36 3,95±0,08 12,14+0,83
изониазидовой Р2-1<0,001 Р2-1<0,001 Р2-1<0,02
гепатопатиеи
(контроль), п=8
3 Животные, 15,32±0,58 2,87±0,19 9,12±0,57
получившие Р3.2<0,001 Рз-2<0,01 Рз-2<0,05
ГТЛ 50 мг/кг и Рз-1<0,05 Рз-1>0,05 Рм>0,05
изониазид, п=8
4 Животные, 18,98±0,73 2,57<0,23 8,72±0,95
получившие Р4.2<0,001 Р4.2<0,001 Р4.2<0,05
ГТЛ 200 мг/кги Р4.1>0,05 Р4.!>0,05 Р4.1>0,05
изониазид, п=8 Р4.з<0,01 Р4.з>0,05 Р4-з>0,05

 

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Из приведенных данных видно, что введение токсической дозы изониазида контрольным животным снизило количество гликогена печени на 45% (р<0,001) относительно показателей интактных животных. Двухнедельный прием ГТЛ в дозе 50 мг/кг и изониазида повысил уровень гликогена печени на 44% (р<0,001), тогда как приём ГТЛ в дозе 200 мг/кг полностью предотвратил потерю гликогена печенью — его количество осталось на уровне интактных животных.

Изониазидовая интоксикация характеризовалась повышением на 63% (р<0,001) холестерина печени. Применение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг нормализовало уровень холестерина в печени.

 

Уровень общего билирубина в сыворотке крови контрольных животных оказался выше уровня интактных животных на 51% (р<0,02). Двухнедельное пероральное введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг полностью нормализовало данный показатель.

Таким образом проведенные эксперименты позволили установить способность ГТЛ в условиях изониазидовой интоксикации существенно снижать явления цитолиза и холестаза и нормализовать метаболические процессы в печени.

 

4.3. ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Тетрахлорметановая интоксикация сопровождалась значительными нарушениями не только функционального состояния печени, но и нарушениями активности факторов естественного иммунитета.

Превентивное введение ГТЛ с последующим введением крысам тетрахлорметана оказало выраженное влияние как на гуморальные, так и на клеточные факторы неспецифического иммунитета.

Изменение гуморальных факторов естественного иммунитета при ССЦ- гепатопатии и влияние ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг приведено в таблице 13 и на рис.3.

Таблица 13

Изменение активности гуморальных факторов неспецифической резистентности у белых крыс с СС14-интоксикацией при введении гомогената трутневых личинок

Группы Лизоцим, (3-лизины, БАСК,
п/п животных % активности % активности % активности
1 2 3 4 5
1 Интактные 46,38±2,31 71,96±2,72 68,26±ЗД8
животные, п=8

 

1 2 3 4 5
2 Животные с ССЦ- интоксикацией (контроль), п=8 69,00±3,23 Рм<0,001 26,9811,36 Р2-1<0,001 17,88±0,77 Р2.1<0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 50 мг/кг и СС14( п=8 52,47+2,96

Рз-2<0,01

Рз-1>0,05

42,54+3,41

Рз-2<0,01

Рз-1<0,001

51,02+3,06

Р3.2<0,001

Рз-1<0,01

4 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 45,88±3,05 Р4.2<0,01 Р4.1>0,05 Р4-з>0,05 54,84±4,38 Р4.2<0,001 Р4.1<0,02 Р4.з>0,05 60,43±3,39 Р4.2<0,001 Р4-1>0,05 Р4-з>0,05

 

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Как следует из приведенных данных, у контрольных животных с тетрахлорметановой интоксикацией по сравнению с показателями интактных животных активность лизоцима увеличилась на 49% (р<0,001), а активность р-лизинов и бактерицидной активность сыворотки уменьшились на 63% (р<0,001) и 74% (р<0,001) соответственно.

Двухнедельное введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг у животных с интоксикацией привело к снижению активности лизоцима соответственно на24% (р<0,01) и 33% (р<0,01) относительно контроля, что обусловило нормализацию активности лизоцима.

Одновременно отмечалось увеличение активности р-лизинов соответственно на 54% (р<0,01) и 103% (р<0,001) по сравнению с контрольными данными.

Бактерицидная активность сывортки крови также значительно возросла — соответственно на 185% (р<0,001) и 238% (р<0,001) по сравнению с контрольными показателями, что в случае применения дозы 200 мг/кг привело среднюю величину бактерицидной активности сыворотки крови к уровню интактных животных.

 

Дальнейшие наблюдения показали, что тетрахлорметановая интоксикация оказала угнетающее действие и на клеточные факторы естественного иммунитета, снизив фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАЛ) — на 66% (р<0,001), процент завершенности фагоцитоза — на 63% (р<0,001),

фагоцитарный индекс лейкоцитов (ФИЛ) — на 68% (р<0,001) по сравнению с показателями интактных животных.

В отличие от этого у опытных групп животных, получивших ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг зарегистрировано резкое увеличение активности фагоцитоза нейтрофилов крови, превышающее уровень интактных животных (таблица 14 и рис. 3).

Таблица 14

Изменение показателей фагоцитарной активности нейтрофилов крови белых крыс с СС14-интоксикацией при введении

гомогената трутневых личинок

% Группы ФАЛ, ПЗФ ФИЛ,
п/п животных % активности ед.активности
1 2 3 4 5
1 Интактные 34,75±1,83 44,7512,94 0,3710,02
животные, п=8
2 Животные 11,7510,99 16,7511,19 0,1210,02
с СС14 Р2-1<0,001 Р2-1<0,001 Р2.1<0,001
интоксикациеи
(контроль), п=8
3 Животные, 37,6911,04 42,2311,92 0,3510,02
получившие Рз-2<0,001 Рз-2<0,001 Рз-2<0,001
ГТЛ 50 мг/кг Рз-1>0,05 Рз-1>0,05 Рз-1>0,05
и СС14, п=8
4 Животные, 45,5012,18 54,6312,51 0,4410,02
получившие Р4.2<0,001 Р4.2<0,001 Р4.2<0,001
ГТЛ 200 мг/кг и Р4.1<0,01 Р4.1<0,05 Р4.1<0,05
СС14, п=8 Р4-з<0,05 Р4-з<0,05 Р4-з<0,05

 

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

ФАЛ соответственно повысился на 220% (р<0,001) и 287% (р<0,001), ПЗФ — на 152% (р<0,001) и 226% (р<0,001), ФИЛ — на 192% (р<0,001) и 266% (р<0,001) относительно контроля. Эти показатели при применении ГТЛ в дозе 50 мг/кг соответствовали нормальным величинам, а для при введении ГТЛ в дозе 200мг/кг — оказались достоверно выше показателей интактных животных: ФАЛ — на 31% (р<0,01), ПЗФ — на 22% (р<0,05), ФИЛ — на 19% (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты опытов свидетельствуют, что острая интоксикация тетрахлорметаном сопровождается не только развитием гепатопатии, но и значительными изменениями уровня изучаемых показателей естественного иммунитета. ГТЛ в этих условиях способен оказывать выраженное активирующее влияние на бета-лизиновую активность и нормализующее влияние на клеточные факторы неспецифической резистентности.

 

4.4 ИЗМЕНЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ИЗОНИАЗИДОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Изониазидовая интоксикация, также как и тетрахлорметановая, сопровождалась не только нарушением функционального состояния печени, но и значительными изменениями показателей неспецифической резистентности. При изониазидовой интоксикации активность лизоцима повысилась на 32% (р<0,02), а (3-лизинов — понизилась на 61% (р<0,001). Однако в отличие от СС14— интоксикации бактерицидная активность сыворотки крови при изониазидовой гепатопатии повысилась на 25% (р<0,02). Предварительное введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг животным с изониазидовой интоксикацией оказало нормализующее влияние на показатели естественного иммунитета (таблица 15 и рис. 4).

Таблица 15

Влияние гомогената трутневых личинок на активность гуморальных факторов естественного иммунитета при изониазидовой интоксикации

Группы Лизоцим, Р-ЛИЗИНЫ, БАСК,
п/п животных % активности % активности % активности
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=8 46,38±2,31 71,9612,72 68,26±3,18
2 Животные с изониазидовой гепатопатией, (контроль), п=8 61,22±4,56 Р2.1<0,02 28,06±1,85 Р2-г<0,001 85,34±4,43 Р2-1<0,02

 

1 2 3 4 5
3 Животные, 43,72±2,51 33,67±2,69 65,91±3,62
получившие РЗ-2<0,02 РЗ-2<0,02 Рз-2<0,02
ГТЛ 50 мг/кг Р3.1>0,05 Р3.1<0,001 Рз-1>0,05
и изониазид, п=8
4 Животные, 42,85±2,71 49,11±3,12 69,27±4,18
получившие Р4.2<0,02 Р42<0,001 Р4.2<0,05
ГТЛ 200 мг/кг и Р4.1>0,05 Р4-1<0,01 Р4.1>0,05
изониазид, п=8 Р4-З>0,05 Р4.з<0,01 Р4.З>0,05

 

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг на фоне изониазидовой интоксикации привело к восстановлению активности лизоцима и бактерицидной активности сыворотки крови до уровня интактных животных и повышению активности (3-лизинов на 20% (р<0,02) и 75% (р<0,001) соответственно.

Аналогичный нормализующий эффект ГТЛ наблюдался и со стороны фагоцитарной активности нейтрофилов крови (таблица 16 и рис.4).

Таблица 16

Влияние гомогената трутневых личинок на активность нейтрофилов крови в условиях изониазидовой интоксикации

% Группы ФАЛ, ПЗФ ФИЛ,
п/п животных % активности ед.активности
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=8 34,75±1,83 44,75±2,94 0,37±0,02
2 Животные с изониазидовой гепатопатией (контроль), п=8 22,59±1,97 Рм<0,01 30,88±2,04 Р2-1<0,01 0,24±0,02 Р2-1<0,01

 

 

1 2 3 4 5
3 Животные, 33,65±2,38 41,87+2,48 0,34±0,02
получившие Рз-г<0,02 Рз-2<0,02 Рз-2<0,02
ГТЛ 50 мг/кг Рз-1>0,05 Рз-1>0,05 РЗ-1>0,05
и изониазид, п=8
4 Животные, 37,14±3,02 46,31+3,41 0,39±0,02
получившие Р