primenenie-trutnevogo-rasploda-7

ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ

Диссертация
на соискание учёной степени
Автор:

КЛИШИНА ИННА ИВАНОВНА
ВЛИЯНИЕ ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА
НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ
НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПЕЧЕНИ
ПРИ ОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

 

Часть II.

Глава 7.
НЕКОТОРЫЕ СТОРОНЫ
МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ
ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК
ПРИ ТЕТРАХОРМЕТАНОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

7.1. ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ «БЕЛКОВОЙ» И «ЛИПИДНОЙ» ФРАКЦИЙ ГОМОГЕНАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК

Установленная в предыдущих исследованиях гепатопротекторная активность трутневого расплода требует выяснения роли конкретных биологически активных веществ расплода в проявлении этой активности. С этой целью исследовалось сравнительное влияние ГТЛ, его «белковой» и «липидной» фракций (БФ и ЛФ) на показатели функционального состояния печени (таблица 27, 28 и рис.9).

Таблица 27

Сравнительное влияние гомогената трутневых личинок, его «белковой» и «липидной» фракций на активность АЛТ, ЩФ и содержание общего билирубина сыворотки крови при тетрахлорметановой интоксикации

№ п/п Группа животных АЛТ, мккат/л ЩФ, мккат/л Общий билиру­бин, мкмоль/л
М±ш, Р М±ш, Р М±ш,Р
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=8 0,51 ±0,01 1,26±0,05 8,04±0,91
2 Животные 1,57±0,03 2,71±0,06 13,53 1,05
с ССЦ-гепатопа- тией (контроль), п=8 Р2.1<0,001 Р2.,<0,001 Рм<0,001
3 Животные, 0,62±0,01 1,22±0,05 8,39±0,06
получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 Рз-2<0,001 Рз-1>0,05 Рз-2<0,001 Рз„1>0,05 Рз-2<0,001 Рз-1>0,05
1 2 3 4 5
4 Животные, 0,81 ±0,02 2,16±0,06 9,20±0,09
получившие БФ Р4.2<0,001 Р4.2<0,001 Р4.2<0,01
и СС14,п=8 Р4.1<0,001 Р4.1 <0,001 Р4., <0,001
Р4.3<0,001 Р4.3<0,001 Р4.3<0,001
5 Животные, 1,48±0,02 2,44±0,05 14,20±1,03
получившие ЛФ Р5-2>0,05 Р5-2<0,01 Р5-2>0,05
и СС14,п=8 Р5-1<0,001 Рм<0,001 Рм<0,001
Р5-з<0,001 Р5-з<0,001 Р5-з<0,01
Р5.4<0,001 Р5-4<0,02 Р5-4<0,01

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Результаты экспериментов свидетельствуют, что в условиях ССЦ- интоксикации профилактическое применение ГТЛ снизило активность АЛТ на 60% (р<0,001), применение его «белковой» фракции — на 48% (р<0,001), тогда как «липидная» фракция не оказала существенного влияния. Применение ГТЛ привело к нормализации активности АЛТ, а применение «белковой» фракции не сопровождалось таким эффектом.

Применение ГТЛ и БФ снизило также активность щелочной фосфатазы по сравнению с контролем на 55% (р<0,001) и 20% (р<0,001), в то время как «липидная» фракция понизила данный показатель всего на 10% (р<0,01).

Содержание общего билирубина в сыворотке крови при ССЦ- интоксикации под влиянием ГТЛ и его «белковой» фракции нормализовалось, а применение липидной фракции не вызвало достоверных изменений по сравнению с контролем.

Таблица 28

Сравнительное влияние гомогената трутневых личинок, его «белковой» и «липидной» фракций на содержание холестерина, триглицеридов и гликогена в печени крыс при тетрахлорметановой интоксикации

Группа Холестерин Триглицериды Гликоген
и/и животных печени, г/кг печени, мкмоль/г печени, г/кг
М±ш,Р М±ш,Р M±m, Р
1 2 3 4 5
1 Интактные 2,73±0,17 17,70±1,03 19,82 1,55
животные,
п=8
2 Животные 4,57±0,10 68,51 5,10 8,34±0,36
с ССЦ-гепато- Рм<0,001 P2-i<0,001 Рм<0,001
патией,п=8
3 Животные, 2,98±0,07 28,64 2,16 12,24±0,56
получившие Р3.2<0,001 Рз-2<0,001 Р3.2<0,001
ГТЛ 200 мг/кг P3-i>0,05 Рз-1<0,01 Рз-1<0,01
и СС14, п=8
4 Животные, 3,27±0,25 50,57±3,33 12,20 0,66
получившие Р4.2<0,001 Р4.2<0,05 Р4.2<0,001
БФ и СС14,п=8 P4.i>0,05 P4.i <0,001 P4.i<0,01
Р4.3<0,001 Р4„з<0,001 Р4.З>0,005
5 Животные, 3,78±0,22 59,35±3,47 8,50±0,83
получившие Р5-2<0,01 Р5-2>0,05 Р5-2>0,05
ЛФ и СС14,п=8 Рм<0,01 P5-i<0,001 P5-i<0,001
Р5-з<0,02 Р5.з<0,001 Р5-з<0,01
Р5.4>0,05 Р5-4>0,05 Р5-4<0,02
Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Нормализующим эффектом сопровождалось влияние ГТЛ и БФ на содержание холестерина печени, тогда как ЛФ лишь снизила его на 17% (р<0,01).

Превентивное применение ГТЛ и его «белковой» фракции одновременно привело к снижению содержания триглицеридов в печени на 58% (р<0,001) и
26% (р<0,05) соответственно, тогда как введение ЛФ не вызвало достоверных изменений.

Профилактический прием ГТЛ и БФ у животных с интоксикацией практически равнозначно увеличил содержание гликогена в печени — на 47% (р<0,001) и 46% (р<0,001) по сравнению с контролем. Введение «липидной» фракции в аналогичных условиях не повлияло на количество гликогена в печени.

Влияние гомогената трутневых личинок, его «белковой» и «липидной» фракций на показатели функционального состояния печши при тетрахлорметановой интоксикации

Таким образом, результаты экспериментов показали, что вклад «белковой» фракции в реализацию гепатозащитного эффекта ТТЛ у животных с ССЦ-интоксикацией значительно больший, чем «липидной» фракции.

 

7.2. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ «БЕЛКОВОЙ» И «ЛИПИДНОЙ» ФРАКЦИЙ ГОМОГЕНАТА ТРУТНЕВЫХ ЛИЧИНОК НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ В УСЛОВИЯХ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Выяснение вклада белковой и липидной фракций ГТЛ в гепатозащитную активность определило последующее изучение их вклада в изменение активности гуморальных и клеточных факторов естественного иммунитета. Результаты этих опытов представлены в таблицах 29, 30 и на рис. 10.

Таблица 29

Сравнительное влияние гомогената трутневых личинок, его «белковой» и «липидной» фракций на активность факторов естественного иммунитета при тетрахлорметановой интоксикации

№ п/п Группа животных Лизоцим, % активности (3-лизины, % активности БАСК, % активности
М±ш, Р М±ш, Р М±ш,Р
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=8 46,38±2,31 71,96±2,72 68,26±3,18
2 Животные с ССЦ-гепатопа- тией (контроль), п=8 69,00±3,23 Р2-1<0,001 26,98±1,36 Р2-1<0,001 17,88±0,77 Р2.1<0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 45,88±3,05

Рз-2<0,01

Рз-1>0,05

54,84±4,33

Р3.2<0,01

Рз-1<0,02

60,43±3,39

Рз-2<0,01

Рз-1>0,05

1 2 3 4 5
4 Животные, 54,63±3,41 42,77±3,04 46,89±2,64
получившие БФ Р42<0,01 Р4.2<0,001 Р4.2<0,001
и СС14,п=8 Р4-1>0,05 Р4-1<0,001 Р4-1<0,01
Р4.З>0,05 Р4.з>0,05 Р4.з<0,02
5 Животные, 65,63±4,34 30,08±2,20 25,06 2,25
получившие ЛФ Р5-2>0,05 Р5-2>0,05 Р5-2<0,01
и ССЦ,п=8 Р5-1<0,001 Р5-1<0,001 Р5.1<0,001
Р5-з<0,01 Р5-з<0,01 Р5-з<0,001
Р5-4<0,05 Р5-4<0,02 Р5.4<0,001

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

В предыдущих исследованиях (главы 4,5,6) уже было показано, что тетрахлорметановая интоксикация приводит к резкому падению бактерицидной активности сыворотки крови и (3-лизинов и к компенсаторному увеличению количества лизоцима сыворотки.

Профилактическое введение ГТЛ и его «белковой» фракции при интоксикации тетрахлорметаном привело к снижению активности лизоцима сыворотки крови соответственно на 33% (р<0,001) и 21% (р<0,01) по сравнению с контролем, тогда как применение «липидной» фракции не повлияло на контрольный уровень данного показателя

Одновременно применение ГТЛ, «белковой» фракции повысило активность (3-лизинов по сравнению с контролем на 103% (р<0,001) и 59% (р<0,001), также повысило бактерицидную активность сыворотки крови на 238% (р<0,001) и 162% (р<0,001) соответственно. «Липидная» фракция не повлияла на активность (3-лизинов при интоксикации, но повысила на 40% (р<0,01) бактерицидную активность крови.

Проведенные опыты достоверно подтверждают, что позитивное влияние ГТЛ на гуморальные факторы неспецифической резистентности в значительной степени обусловлено его «белковой» фракцией.

Опытные данные по влиянию ГТЛ и его «белковой» и «липидной» фракций в условиях тетрахлорметановой интоксикации приведены в таблице 30 и на рис. 10.

Таблица 30

Сравнительное влияние гомогената трутневых личинок, его «белковой» и «липидной» фракций на фагоцитарную активность нейтрофилов крови крыс при тетрахлорметановой интоксикации

№ п/п Группа животных ФАЛ, % активности ПЗФ ФИЛ, ед.активности
M±m, Р М±ш, Р M±m, Р
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=8 34,75±1,83 44,75±2,94 0,37±0,02
2 Животные с ССЦ-гепатопа- тией (контроль), п=8 11,75±0,99 Р2.,<0,001 16,75±1,19 P2-i<0,001 0,12±0,02 Р2_,<0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 45,50±2,18

Р3.2<0,001

Рз-1<0,01

54,63±2,50

Рз-2<0,001

Р3.1<0,05

0,46±0,02 Р3.2<0,001 Рз-1<0,01
4 Животные, получившие БФ и СС14,п=8 30,50±2,08 Р4.2<0,001 P4.I>0,05 Р4-з<0,01 41,38 2,58 Р4.2<0,001 P4.I>0,05 Р4-З<0,01 0,31 ±0,02 Р4.2<0,001 P4-I>0,05 Р4.3<0,01
5 Животные, получившие ЛФ и СС14,п=8 18,50 1,59

Р5-2<0,01

Р5-1<0,001

Р5-з<0,001

Р5-4<0,01

22,50±2,67

Р5-2>0,05

P5-i<0,001

Р5-з<0,001

Р5-4<0,01

0,19±0,01

Р5-2<0,01

Р5.1<0,001

Р5.3<0,001

Р5-4<0,01

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Пониженная интоксикацией фагоцитарная активность повысилась при

применении ГТЛ: ФАЛ — на 287% (р<0,001), ПЗФ — на 226% (р<0,001), ФИЛ —
на 283% (р<0,001), при этом уровень полученных показателей находился достоверно выше нормы. Применение «белковой» фракции ГТЛ привело к нормализации всех регистрируемых показателей фагоцитоза нейтрофилов, а применение «липидной» фракции ФАЛ увеличило на 57% (р<0,01), ФИЛ — на 58% (р<0,01), что не сопровождалось нормализацией данных контстант. При этом показатель ПЗФ остался на уровне контрольных животных.

Таким образом, результаты опытов доказали, что иммуномодулирующее влияние на гуморальные и клеточные факторы естественного иммунитета гомогената трутневых личинок в большей степени обусловлен его «белковой» фракцией, вклад «липидной» фракции незначителен и не распространяется на весь комплекс изучаемых показателей.

 

 

7.3. ИЗМЕНЕНИЕ ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ПЕЧЕНИ

Для подтверждения гепатозащитного действия трутневых личинок при СС14-интоксикации дополнительно проводили гистоморфологические исследования.

У интактных животных при окраске Суданом III жировые клетки выявлялись в незначительном количестве и были локализованы в области перипортальных зон ацинусов печеночной дольки. Гликоген при окраске шик- реакцией определялся в интермедиарной зоне дольки, а также в области портальных трактов в виде гнездных скоплений [160, 174]. Количественные характеристики по содержанию жировых клеток и гликогена представлены в таблицах 31, 32.

Таблица 31

Влияние гомогената и лиофилизата трутневых личинок, лив-52 на содержание жировых клеток печени

в поле зрения при тетрахлорметановой интоксикации

Группы животных Содержание Р %
п/п жировых клеток, М±ш
1 2 3 4 5
1 Интактные животные, п=6 6,4±1,4
2 Животные с гепатопа- тией (контроль), п=6 45,2±8,9 P2-i<0,001 100
3 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=6 22,5±4,2 Рз-2<0,05 Рз-1<0,02 49,8
4 Животные, получившие ЛТЛ 50 мг/кг и СС14, п=6 24,9±4,5 Р4.2<0,05 P4.i<0,01 Р4.з>0,05 55,1
5 Животные, получившие лив-52 мг/кг и СС14, п=6 37,4±4,1 Р5-2>0,05 Р5.,<0,001 Р5-з<0,05 Р5.4>0,05 82,7
Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

Таблица 32

% Группы животных Количество клеток с гликогеном в Рк
п/п поле зрения, оценка в баллах
0 1 2 3
1 2 3 4 5 6 7
1 Интактные животные, п=6 0 8 17 14
2 Животные с гепатопатией (контроль), п=6 20 15 0 0 <0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=6 5 15 10 0 <0,05
4 Животные, получившие ЛТЛ 50 мг/кг и ССЦ. п=6 5 15 10 0 <0,05
5 Животные, получившие лив-52 мг/кг и ССЦ, п=6 5 15 10 0 <0,05

Примечание: п — количество животных;

Рк — достоверность различий по отношению к показателям контрольной группы.

У интактных животных обзорный препарат, полученный с помощью окраски гематоксилин-эозином без особенностей. Балочное строение печеночных долек сохранено. Центральные вены умеренно полнокровные. Жиросодержащие клетки в незначительном количеств (6,4±1,4, р<0,05), локализуются в области расположения перипортальных гепатоцитов [42,160].

Влияние гомогената и лиофилизата трутневых личинок, лив-52 на накопление гликогена печени крыс при ССЦ-интоксикации

У животных с ССЦ-интоксикацией клетки печени находились в состоянии жировой дистрофии, образуя сливные островки жировой ткани. Жировая дистрофия носила крупнокапельный характер. Содержание жировых клеток в этих условиях резко увеличилось по сравнению с препаратами интактных животных и составляет 45,2±8,9 (таблица 31). Изменилась и
локализация жиросодержащих клеток: максимальное количество суданположительных клеток обнаруживалост в централобулярных отделах печеночной дольки. В участках слияния жировых клеток встречались гепатоциты с цитоплазмой пенистого типа, что свидетельствует о разнородности в липидных включениях, носящих средний и крупнокапельный характер [42].

В перипортальных зонах наблюдалась инфильтрация лимфоцитами и макрофагами и, как следствие, формирование перипортальных некрозов. Среди жир-инфильтрированных клеток встречались клетки с наличием белково- гидропической дистрофии — с центрально расположенными ядрами и перинуклеарным просветлением цитоплазмы [160].

У животных с коррекцией токсического гепатита объектами трутневыми личинками наблюдалось полнокровие сосудов триад при сохранении декомпенсации печеночных балок. Выявились клетки с гиалиновыми включениями по типу «телец Маллори» [130]. Инфильтрированные жировые клетки локализовались по периферии печеночной дольки. Их количество снижалось. Жировая дистрофия отсутствовала в области светлых гепатоцитов Отмечалось увеличение содержания гликогена в гепатоцитах (таблица 32).

Все эти изменения свидетельствовали о благоприятном влиянии трутневых личинок на саногенез патологического процесса при интоксикации тетрахлорметаном [174, 177]. Причем этот эффект был выражен более отчетливо в сравнении с официнальным препаратом лив-52.

 

7.4. ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ТБК-АКТИВНЫХ ПРОДУКТОВ

Гепатобилиарная патология в значительной степени определяется активацией перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран, мощным индуктором которой является тетрахлорметан [2,31, 171]. Так как в реализации гепатопротекторного действия биологически активных веществ ведущее место отводится антиоксидантиым свойствам, мы провели опыты по определению сравнительного влияния нативной и лиофилизированной форм трутневого расплода и гепатопротектора лив-52 и на интенсивность накопления ТБК- активных продуктов в сыворотке крови в условиях СС14-интоксикации (таблица 33 и рис.11).

Таблица 33

Влияние гомогената и лиофилизата трутневых личинок, лив-52 на накопление ТБК-активных продуктов в сыворотке крови

в условиях тетрахлорметановой интоксикации

Группа животных ТБКАП, мкмоль/л
п/п М±ш Р
1 2 3 4
1 Интактные животные, п=8 4,28±0,06
2 Животные с СС14-интокси- кацией (контроль), п=8 10,18±0,34 Р2-1<0,001
3 Животные, получившие ГТЛ 50 мг/кг и СС14, п=8 7,23±0,26 Рз-2<0,001 Рз-1<0,001
4 Животные, получившие ГТЛ 200 мг/кг и СС14, п=8 3,80 0,21 Р4.2<0,001

Р4.1>0,05

Р4.3<0,001

5 Животные, получившие ЛТЛ 50 мг/кг и СС14, п=8 4,60±0,26 Р5-2<0,001 Р5-1>0,05 Р5-з<0,01 Р5.4<0,05
6 Животные, получившие лив- 52 и СС14> 50 мг/кг, п=8 7,19 0,25 Р6.2<0,001

Р6.!<0,001

Р6-з>0,05

Р6-4<0,001

Р6.5<0,001

Примечание: п — количество животных;

Р — достоверность различий между группами.

В условиях СС14-повреждения печени содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке крови увеличилось на 138% (р<0,001) по сравнению с уровнем интактных животных.

Профилактическое введение ГТЛ в дозах 50 и 200 мг/кг снизило содержание ТБКАП в сыворотке крови по сравнению с контролем на 29% (р<0,001) и 63% (р<0,001), ЛТЛ в дозе 50 мг/кг — на 55% (р<0,001), лив-52 — на 29% (р<0,001). При этом применение ГТЛ в дозе 200 мг/кг и ЛТЛ в дозе 50 мг/кг снизили уровень ТБК-активных продуктов до уровня интактных животных. В случае применения ГТЛ в дозе 50 мг/кг и лив-52 в аналогичных условиях нормализации не произошло.

Приведенные данные свидетельствуют о выраженном антиоксидантном действии ГТЛ в дозе 200 мг/кг и ЛТЛ в дозе 50 мг/кг, которые в условиях тетрахлорметановой интоксикации полностью предотвращали накопление перекисных продуктов в сыворотке крови и существенно превышали эффективность влияния лив-52.

Влияние гомогената и лиофилизата трутневых личинок, лив-52 на содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке крови при тетрахлорметановой

График (1)

Интакт- Конт- ГТЛ(50) ГТЛ(200) ЛТЛ(50) Лив(50) ные

роль тетрахлор-тетрахлор-тетрахлор- тетра-

метан метан метан хлор-

метан

*-достоверность различий по отношению к контролю

■ ТБК-активные продукты сыворотки крови

 

7.5. ИЗУЧЕНИЕ АНАБОЛИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

Ключевым звеном анаболических путей в организме является белково- синтетическая функция печени, поэтому мы провели опыты по изучению влияния двух форм трутневого расплода и лив-52 на содержание белка и нуклеиновых кислот в печени крыс при СС14-интоксикации. Результаты опытов о